細(xì)胞培養(yǎng)瓶是實驗室進行長時間細(xì)胞培養(yǎng)、大量細(xì)胞擴增和防污染的最適培養(yǎng)器皿。細(xì)胞培養(yǎng)瓶可方便、安全地處理細(xì)胞,確保實驗流程安全進行。
什么是細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞培養(yǎng)瓶是實驗室進行長時間細(xì)胞培養(yǎng)、大量細(xì)胞擴增和防污染的最適培養(yǎng)器皿。細(xì)胞培養(yǎng)瓶可方便、安全地處理細(xì)胞,確保實驗流程安全進行。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的材質(zhì)
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的材質(zhì)可分為玻璃的和塑料(聚丙乙烯),玻璃的瓶子表面是親水的,細(xì)胞貼壁效果好,而塑料材質(zhì)的瓶子需要經(jīng)過表面的改性處理后才能支持細(xì)胞貼壁培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的貼壁效果
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的貼壁效果可分為表面改性處理和未表面處理,聚苯乙烯(PS)表面是憎水的,一次性細(xì)胞培養(yǎng)皿等標(biāo)明Tissue?。悖酰欤簦酰颍濉。簦颍澹幔簦澹涫潜硎驹撈髅蠼?jīng)過表面的改性處理,適合貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子種類
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子可分為密閉蓋、聚酯蓋、透氣蓋(強烈推薦)、隔墊蓋等。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的瓶頸種類
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的瓶頸也有多種樣式,有直頸、斜頸、角度頸、三角形、矩形。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部分類
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的底部可分為正方形、長方形、三角形等,根據(jù)細(xì)胞貼壁面積又可以分為25~175cm2多種。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的使用注意事項
(1)關(guān)于蓋子
一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子不要擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH?。罚玻罚捶秶鷥?nèi)具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。
HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下,一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色。
(2)降低“生長空洞”
多數(shù)用戶使用的不是的預(yù)包被一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶,而是普通的一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶,其表面環(huán)境并不利于無血清培養(yǎng)環(huán)境下的間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁。37℃放置5-10分鐘,可讓培養(yǎng)基中的促貼壁物質(zhì)更好地與一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶底部結(jié)合,使得間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁能力增強,降低“生長空洞”出現(xiàn)的概率。
(3)細(xì)胞消化
將瓶子豎立放置,吸走培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基中的脫落細(xì)胞較多,說明細(xì)胞現(xiàn)在很容易脫落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來回輕微晃動培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞完全脫落,加入10mlMEM,混勻,不能吹打,分裝2瓶。
如果細(xì)胞沒長滿就脫落,則只需加入5mlMEM,不分裝。
如果瓶中的細(xì)胞貼壁較牢固,培養(yǎng)基上清沒有細(xì)胞脫落碎片,且細(xì)胞長滿達到80%以上,吸走培養(yǎng)基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動,豎立培養(yǎng)瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過3min,細(xì)胞完全消化脫壁,取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻,分裝2瓶。
細(xì)胞對于生長環(huán)境非常敏感,細(xì)胞培養(yǎng)瓶作為一種較為常用的耗材,在操作時更要謹(jǐn)慎,嚴(yán)格按照規(guī)定流程進行,避免因操作不當(dāng)影響細(xì)胞生長。
應(yīng)用場景
一般在實驗室使用較多。
(文章來源于互聯(lián)網(wǎng))