病理切片是什么？病理切片是取一定大小的病變組織，用病理組織學(xué)方法制成病理切片〔通常將病變組織包埋在石蠟塊里，用切片機切成薄片，再用蘇木精－伊紅（Ｈ－Ｅ）染色〕，用顯微鏡進一步檢查病變。病變的發(fā)生發(fā)展過程，最后作出病理診斷。

它制作時將部分有病變的組織或臟器經(jīng)過各種化學(xué)品和埋藏法的處理，使之固定硬化，在切片機上切成薄片，粘附在玻片上，染以各種顏色，供在顯微鏡下檢查，以觀察病理變化，作出病理診斷，為臨床診斷和治療提供幫助。

那病理切片的制作步驟是怎么樣的呢？一起了解一下：

１．取材

（１）材料新鮮：取材組織愈新鮮愈好，人體組織一般在離體后，動物組織在處死后迅速固定，以保證原有的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。

（２）組織塊的大小：所取組織塊較理想的體積為５０ｐｘ×５０ｐｘ×７．５ｐｘ，以使固定液能迅速而均勻地滲入組織內(nèi)部，但根據(jù)制片材料和目的不同，組織塊的較理想體積也不同，如制作病理外檢、科研切片，其組織塊可以薄?。埃薄担穑纯?，這樣可以縮短固定脫水透明的時間，若制作教學(xué)切片厚取０．３～１２．５ｐｘ，這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。

（３）勿擠壓組織塊：切取組織塊用的刀剪要鋒利，切割時不可來回銼動。夾取組織時切勿過緊，以免因擠壓而使組織、細胞變形。

（４）規(guī)范取材部位：要準(zhǔn)確地按解剖部位取材，病理標(biāo)本取材按照各病變部位、性質(zhì)的不同，根據(jù)要求規(guī)范化取材。

（５）選好組織塊的切面：根據(jù)各器官的組織結(jié)構(gòu)，決定其切面的走向?？v切或橫切往往是顯示組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵，如長管狀器官以橫切為好。

（６）保持材料的清潔：組織塊上如有血液、污物、黏液、食物、糞便等，可用水沖洗干凈后再放入固定液中。

（７）保持組織的原有形態(tài)：新鮮組織固定后，或多或少會產(chǎn)生收縮現(xiàn)象，有時甚至完全變形。為此可將組織展平，以盡可能維持原形。

２．固定

（１）小塊組織固定法：這是最常用的方法，從人體或動物體取下的小塊組織，須立即置入液態(tài)固定劑中進行固定，通常，標(biāo)本與固定液的比例為１：４～２０，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為５０ｐｘ×５０ｐｘ×７．５ｐｘ。

（２）注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部，或需要對整個臟器或整個動物體進行固定。這時宜采用注射固定或灌注固定法。將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達整個組織和全身，從而得到充分的固定。

（３）蒸汽固定法：比較小而厚的標(biāo)本，可采用鋨酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，則應(yīng)在血片未干燥前采用鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。

最常用的固定液有１０％甲醛固定液和９５％乙醇固定液。

３．脫水透明

標(biāo)本經(jīng)過固定和沖洗后，組織中含有較多的水分，必須將組織塊內(nèi)的水分置換出來，這一過程叫作脫水。無論是用石蠟切片，還是用火棉膠切片，都必須除去組織中所含水分，因含水組織與石蠟、火棉膠等包埋材料不相容，常用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。

脫水的步驟是：８０％、９０％、９５％、１００％各種濃度乙醇２小時，此過程可用脫水機自控完成。

丙酮也是一種脫水能力很強的脫水劑，但因其脫水能力很強，對組織有劇烈收縮作用，在制作科研、教學(xué)切片時一般不用該試劑。因乙醇、丙酮等不溶于石蠟，還要經(jīng)過一個能溶于石蠟的溶劑替代過程稱為透明。常用的透明劑有二甲苯、三氯甲烷、水楊酸甲酯等。

４．浸蠟、包埋

（１）使石蠟浸入組織中，取代組織中含有的透明劑。

（２）包埋：將浸蠟后的組織置于融化的固體石蠟中，石蠟?zāi)毯?，組織即被包在其中，稱蠟塊，此

過程稱為包埋。

５．切片和貼片

（１）修整蠟塊：可視其組織的大小，在組織邊緣約０．１～５ｐｘ處，切去余蠟部分，否則易造成組織

皺縮不平。

（２）準(zhǔn)備好切片用具：切片刀、毛筆、眼科鑷子（彎）、漂烘溫控儀

（３）安裝蠟塊：將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。

（４）安裝切片刀：將切片刀安裝在切片機的刀臺上，把刀臺上的緊固螺絲旋緊，使切片時不產(chǎn)生振

動，能保持一定的切片厚度。

（５）切片的厚度：切片機的厚度調(diào)節(jié)器上刻有０～５０μｍ或０～２５μｍ，可任意選擇其厚度，石蠟切片

的厚度一般在４～６μｍ。

（６）切片

（７）鋪片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在４０～４５℃的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的

蠟帶自然展平。

（８）貼片、烘片：待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處傾去載玻片上的余

水，置入６０～６５℃恒溫箱內(nèi)或切片漂烘溫控儀的烘箱內(nèi)烤片１５～３０分鐘，脫去溶化組織間隙的石蠟。

６．染色和封片

常用的染色方法是蘇木素－伊紅（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－Ｅｏｓｉｎ）染色法，簡稱Ｈ．Ｅ染色法。這種方法對任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種包埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料，可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍色，如細胞核中的染色質(zhì)等；伊紅是一種酸性染料，可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色，如多數(shù)細胞的胞質(zhì)、核仁等在Ｈ．Ｅ染色的切片中均呈紅色。

Ｈ．Ｅ染色程序如下：脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固。

常規(guī)蘇木素染色中的對比染色是用伊紅，近年來在英、美國家的一些實驗室則采用焰紅（ｐｈｌｏｘｉｎｅ），此外也有用桔黃Ｇ（Ｏｒａｎｇｅ?。牵?、比布里希猩紅（Ｂｉｅｂｒｉｃｈ?。螅悖幔颍欤澹簦?、波爾多紅（Ｂｏｒｄｅａｕｘ?。颍澹洌┑茸鳛閷Ρ热旧Ｒ良t為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。

那么在常規(guī)組織制片中，切片是最重要的技術(shù)之一，其質(zhì)量好壞直接影響標(biāo)本的觀察效果。好的切片機是整個制備過程的重要環(huán)節(jié)，要制備１張好的切片，病理工作人員必須將技術(shù)、知識和技巧進行完美的結(jié)合。

首先，待切樣品的質(zhì)量是關(guān)鍵因素，而樣品質(zhì)量取決于前期處理工作的準(zhǔn)確無誤，包括固定、脫水、包埋等；必須選擇正確型號的切片機以及合適的鋼刀或一次性刀片；切片時需認(rèn)真考慮樣品類型、大小、厚度，兼顧操作者的便利性和舒適性。

其次，要切出高質(zhì)量的切片，操作者豐富的經(jīng)驗必不可少。操作者必須懂得切片機的工作原理，對機器進行精細調(diào)節(jié)以達最佳效果；能應(yīng)對常見故障，消除一些潛在的影響因素；無論使用鋼刀還是一次性刀片，切緣必須鋒利，且不能有任何缺口或雜質(zhì)附著。