藥物入醫(yī)保大大提高了治療的可及性，極大減輕患兒家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的同時(shí)，也使得關(guān)鍵措施的早期篩查有了極大發(fā)展。今天就來聊聊ＳＭＡ。

０１　　什么是ＳＭＡ

脊髓性肌肉萎縮癥（Ｓｐｉｎａｌ?。停酰螅悖酰欤幔颉。粒簦颍铮穑瑁。樱停粒┦且唤M以緩慢進(jìn)行性加重、肢體近端對(duì)稱性肌無力、肌萎縮為主要臨床表現(xiàn)的常染色體隱性遺傳病。類似漸凍癥卻比漸凍癥更為嚴(yán)重，是２歲以下嬰幼兒的“頭號(hào)遺傳病殺手”。

ＳＭＡ是常染色體隱性遺傳病，攜帶率為１／５０～１／６０，發(fā)病率為１／６０００～１／１００００活產(chǎn)胎兒。如果父母均是攜帶者，而新生兒患病的概率為１／４。

０２?。樱停林虏C(jī)制

ＳＭＡ與ＳＭＮ運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因（Ｓｕｒｖｉａｌ?。铮妗。恚铮簦铮颉。睿澹酰颍铮睿蟆。纾澹睿澹┫嚓P(guān)，定位于５ｑ１３．２。

ＳＭＮ有２個(gè)高度同源拷貝ＳＭＮ１（ＯＭＩＭ?。叮埃埃常担矗┖停樱停危玻ǎ希停桑汀。叮埃保叮玻罚?，兩者僅有５個(gè)堿基差別，其中２個(gè)堿基位于外顯子７、８，另３個(gè)堿基在內(nèi)含子６、７中。

ＳＭＮ１基因７號(hào)外顯子純合缺失是ＳＭＡ的主要致病原因。在健康人中，該基因會(huì)產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白或ＳＭＮ蛋白，對(duì)控制肌肉的神經(jīng)功能至關(guān)重要。如果ＳＭＮ１外顯子７缺失，則無法合成ＳＭＮ蛋白，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞就無法正常運(yùn)作并最終死亡，導(dǎo)致肌肉無力，進(jìn)而影響人的日常生活甚至生命。

ＳＭＮ２基因拷貝數(shù)增加有利于ＳＭＡ癥狀減輕。每個(gè)人ＳＭＮ２拷貝數(shù)可能是０、１、２、３、或者４個(gè)。一個(gè)病人擁有的ＳＭＮ２基因拷貝數(shù)量越多，則他發(fā)病的時(shí)間越晚、病情越輕。

ＳＭＡ攜帶者的ＳＭＮ１基因型主要分為４種，患病基因型有３種。

備注：將攜帶１個(gè)ＳＭＮ１基因拷貝定義為１拷貝（１‐ｃｏｐｙ）；將攜帶２個(gè)ＳＭＮ１基因拷貝定義為２拷貝（２‐ｃｏｐｙ）。在致病等位基因中，將攜帶ＳＭＮ１　缺失或因轉(zhuǎn)換導(dǎo)致的ＳＭＮ１缺失定義為０拷貝（０‐ｃｏｐｙ）；將攜帶微小變異的ＳＭＮ１基因定義為１ｄ。

０３　?。樱停料嚓P(guān)基因診斷技術(shù)

目前臨床主要的拷貝數(shù)檢測(cè)技術(shù)有ＭＬＰＡ和ｑＰＣＲ技術(shù)：

多重連接探針擴(kuò)增（ＭＬＰＡ）：

ＭＬＰＡ方法針對(duì)ＳＭＮ１與ＳＭＮ２基因第７和第８外顯子堿基差異位點(diǎn)設(shè)計(jì)雜交探針，采用其他染色體位點(diǎn)的多個(gè)管家基因作為內(nèi)參基因，以ＳＭＮ１∶ＳＭＮ２不同拷貝數(shù)的樣本作為平行對(duì)照，在完成雜交連接等系列反應(yīng)后，根據(jù)熒光峰面積的比值比來判斷目標(biāo)基因序列的拷貝數(shù)。

ＭＬＰＡ技術(shù)通過直接檢測(cè)ＳＭＮ１拷貝數(shù)，明確區(qū)分患者、攜帶者及正常人；還可同時(shí)檢測(cè)患者的ＳＭＮ２拷貝數(shù)，是目前國(guó)內(nèi)外ＳＭＡ管理共識(shí)推薦使用診斷ＳＭＡ的金標(biāo)準(zhǔn)。但是該方法不能檢測(cè)ＳＭＮ１基因微小變異與ＳＭＮ１［２＋０］基因型。

熒光定量ＰＣＲ：

主要原理是通過多重實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ　反應(yīng)，以管家基因序列為內(nèi)參，采用Ｔａｑｍａｎ探針法分別對(duì)ＳＭＮ１基因第７和第８外顯子進(jìn)行拷貝數(shù)相對(duì)定量，來判斷是否發(fā)生缺失變異。

該方法優(yōu)勢(shì)是操作簡(jiǎn)便、成本低廉，適用于人群篩查，但其特異性相比ＭＬＰＡ方法略遜，且ＳＭＮ２拷貝數(shù)需要另外設(shè)計(jì)探針進(jìn)行檢測(cè)。同樣不能檢測(cè)ＳＭＮ１基因微小變異和［２＋０］基因型。

此外巢式ＰＣＲ，ＰＣＲ－ＲＦＬＰ，ＤＨＰＬＣ，Ｓａｎｇｅｒ測(cè)序，數(shù)字ＰＣＲ，ＮＧＳ等技術(shù)也都在ＳＭＡ檢測(cè)中有應(yīng)用，每種方法都有自己的優(yōu)劣勢(shì)。

０４　?。樱停翙z測(cè)市場(chǎng)容量

ＳＭＡ主要檢測(cè)主要針對(duì)人群為婚檢、孕檢以及新生兒等人群?，F(xiàn)在每年大概１０００萬新生兒，每個(gè)ＳＭＡ檢測(cè)數(shù)百元不等（如深圳３５１元，青島６００元），粗略算下至少也是一個(gè)幾十億的市場(chǎng)容量。

０５　?。樱停翙z測(cè)產(chǎn)品

從ＮＭＰＡ官網(wǎng)搜索，ＳＭＡ檢測(cè)共有３個(gè)產(chǎn)品取得注冊(cè)證。

１）上海五色石

五色石的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因１（ＳＭＮ１）外顯子缺失檢測(cè)試劑盒?。晒舛浚校茫曳ǎ┦窃谥袊?guó)最早獲批的ＳＭＡ檢測(cè)產(chǎn)品，采用ＭＧＢ探針實(shí)時(shí)多重?zé)晒舛浚校茫业姆椒?，使用人ＲＰＰ４０基因作為?nèi)標(biāo)基因，分別對(duì)ＳＭＮ１基因第７外顯子和第８外顯子（目的基因）進(jìn)行擴(kuò)增并對(duì)拷貝數(shù)進(jìn)行相對(duì)定量檢測(cè)，同時(shí)采用化學(xué)阻斷的方法控制運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因２對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 創(chuàng)新—國(guó)內(nèi)首創(chuàng)，全球首次合法化認(rèn)證

• 快速—近２小時(shí)可完成實(shí)驗(yàn)，自動(dòng)判讀、結(jié)果精準(zhǔn)

• 經(jīng)濟(jì)—通用技術(shù)平臺(tái)、樣本通量大、檢測(cè)成本低

• 安全—全程閉管操作、避免污染、人體無害

• 榮譽(yù)—２０１５年被ＣＦＤＡ評(píng)為“國(guó)內(nèi)首創(chuàng)具有顯著臨床應(yīng)用價(jià)值的創(chuàng)新醫(yī)療器械產(chǎn)品”

• 榮譽(yù)—首屆“創(chuàng)之星”杯中國(guó)體外診斷最佳創(chuàng)新產(chǎn)品（試劑），獲得　“一等獎(jiǎng)”

• 榮譽(yù)—入選科技部《創(chuàng)新醫(yī)療器械產(chǎn)品目錄（２０１８）》

２）　天隆科技人運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因?。保ǎ樱停危保z測(cè)試劑盒（ＰＣＲ－熔解曲線法）

該產(chǎn)品通過設(shè)計(jì)特異性ＡＲＭＳ－ＰＣＲ引物，并采用熔解曲線法分析，可以準(zhǔn)確地定量檢測(cè)ＳＭＮ１基因第７、第８號(hào)外顯子拷貝數(shù)，實(shí)現(xiàn)ＳＭＡ患者的輔助診斷和攜帶者篩查。

方案優(yōu)勢(shì)：

• 權(quán)威認(rèn)證：獲得中國(guó)ＮＭＰＡ認(rèn)證、歐盟ＣＥ認(rèn)證。

• 結(jié)果精準(zhǔn)：引物特異，結(jié)合熔解曲線分析，純合及雜合缺失皆可檢測(cè)。

• 操作便捷：采用自動(dòng)化核酸提取，并基于熒光ＰＣＲ平臺(tái)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果自動(dòng)判讀。

• 經(jīng)濟(jì)高效：相比ＰＣＲ－ＲＦＬＰ及ＭＬＰＡ等方法，檢測(cè)成本更低；２小時(shí)左右即可完成９６個(gè)樣本檢測(cè)。

• 安全可控：血樣全程閉管檢測(cè)，避免樣本污染檢測(cè)靶標(biāo)定性檢測(cè)人基因組　ＤＮＡ　中第?。贰⊥怙@子和（或）第　８　外顯子

３）深圳會(huì)眾

人運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因１（ＳＭＮ１）檢測(cè)試劑盒（ＰＣＲ－熒光探針法）

該產(chǎn)品通過對(duì)ＳＭＡ致病基因ＳＭＮ１外顯子７的拷貝數(shù)檢測(cè)，可明確檢測(cè)患者、攜帶者、正常人的三種不同基因型。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

• 檢測(cè)快速：１小時(shí)出結(jié)果

• 防污染：ＵＮＧ酶防污染體系，防止氣溶膠污染

• 結(jié)果易判讀：ＲＱ值直接判讀結(jié)果

• 高通量：一次可檢測(cè)１－３８４個(gè)樣本

• 高靈敏度：檢測(cè)下限為２ｎｇ／μｌ

• 簡(jiǎn)化配液：２種組份，試劑配制簡(jiǎn)單

４）　貝瑞基因今年６月份貝瑞基因公告稱獲得用于檢測(cè)ＳＭＡ（脊髓性肌萎縮癥）中多種突變的引物組、試劑盒、方法和系統(tǒng)，主要包括構(gòu)建三代測(cè)序文庫(kù)、基于三代測(cè)序檢測(cè)ＳＭＡ疾病相關(guān)基因突變等。據(jù)了解，這項(xiàng)發(fā)明專li是國(guó)際上首創(chuàng)的針對(duì)ＳＭＡ的三代測(cè)序解決方案。

０６　　寫在最后