液相色譜儀是一種常用的色譜分析儀器,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)??捎糜诟叻悬c(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。
什么是液相色譜儀
液相色譜儀是一種常用的色譜分析儀器,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
液相色譜儀的組成
由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
液相色譜儀的用途
可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。
液相色譜儀的工作原理
利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異,使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
液相色譜儀的類(lèi)型
(1)液液分配色譜儀。
(2)液固吸附色譜儀。
(3)離子色譜儀。
(4)凝膠色譜儀。
(5)親和色譜儀。
液相色譜儀的日常維護(hù)及注意事項(xiàng)
(1)泵
①放置了一天或以上的水相或含水相的流動(dòng)相如需再用,需用微孔濾膜重新過(guò)濾;
②蠕動(dòng)泵清洗瓶中的95%的水/甲醇或異丙醇要求每天更換。若液相使用頻率不高,建議每天使用前更換,以免水長(zhǎng)細(xì)菌損壞泵中各組件;
③為了保證U3000泵的安全運(yùn)行,必須設(shè)定高、低壓極限(一般安裝以設(shè)置好);
④流動(dòng)相禁止使用氯仿、三氯(代)苯、亞甲基氯、四氫呋喃、甲苯等;慎重使用四氯化碳、乙醚、異丙醚、酮、甲基環(huán)己胺等,以免造成對(duì)柱塞密封圈的腐蝕。若需要使用正相系統(tǒng)分析樣品,需要另行安裝耐腐蝕的正相密封圈;
⑤擰松快速清洗閥時(shí),不宜擰得過(guò)松。一般擰松2圈左右即可。擰得過(guò)松流動(dòng)相容易從清洗閥部位流進(jìn)泵頭中引起報(bào)警;
⑥使用快速清洗閥時(shí),只能逐個(gè)通道的排氣泡,不得將幾個(gè)通道同時(shí)按比例排氣泡,比例閥的快速切換易導(dǎo)致?lián)p壞;
⑦流動(dòng)相一定要過(guò)濾和超聲脫氣;
⑧詳細(xì)操作及注意事項(xiàng)可參考泵的硬件說(shuō)明書(shū)。
(2)手動(dòng)進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器
①手動(dòng)進(jìn)樣閥每天做完樣后,一定要用甲醇沖洗定量環(huán)中的雜質(zhì)。若樣品為水系,則先用去離子沖洗定量環(huán)再用甲醇沖洗;
②手動(dòng)進(jìn)樣閥一定要注意不要使用不規(guī)范的過(guò)長(zhǎng)的平頭針頭或普通的尖銳的針頭,易扎破六通閥中的墊片而導(dǎo)致漏液、進(jìn)樣不準(zhǔn)確;
③自動(dòng)進(jìn)樣器建議用水和有機(jī)溶劑混合的不含鹽的溶液進(jìn)行洗針,不要使用緩沖鹽;
④樣品必須要使用相應(yīng)的微孔濾膜過(guò)濾,以免堵塞進(jìn)樣器的針頭或色譜柱;
⑤樣品瓶放置在自動(dòng)進(jìn)樣器的托盤(pán)之后,要檢查瓶子是否未放穩(wěn)或放歪,以免進(jìn)樣時(shí)將針頭扎彎或變形;
⑥每天洗針前要更換相應(yīng)的流動(dòng)相或洗液;
⑦盡量不要手動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)樣器的托盤(pán),需要放置樣品或轉(zhuǎn)動(dòng)樣品盤(pán)前請(qǐng)使用進(jìn)樣器前面板的磁性筆觸控屏幕或在軟件中使用移動(dòng)盤(pán)或瓶到前面來(lái)轉(zhuǎn)動(dòng)樣品盤(pán);
⑧重復(fù)使用樣品蓋時(shí),請(qǐng)將含硅膠的一面朝下,以免硅膠粒堵塞進(jìn)樣針。如何確認(rèn)哪一面是硅膠可以參考相應(yīng)的樣品蓋描述或說(shuō)明書(shū);
⑨其它使用和注意事項(xiàng)請(qǐng)考考進(jìn)樣器的硬件說(shuō)明書(shū)。
(3)柱溫箱
①柱溫箱一旦發(fā)生報(bào)警,一定要及時(shí)找到原因。若實(shí)驗(yàn)室濕度太高,則需采取相應(yīng)的除濕措施。若柱溫箱中發(fā)生漏液現(xiàn)象,則需及時(shí)擰緊色譜柱并擦干漏液,長(zhǎng)時(shí)間的漏液極易損壞柱溫箱中的傳感器;
②若實(shí)驗(yàn)中使用了緩沖鹽或其它電解質(zhì),在做完實(shí)驗(yàn)后,系統(tǒng)和色譜柱一定要充分清洗;
③柱溫箱使用溫控過(guò)程中,盡量不要打開(kāi)前門(mén),否則傳感器會(huì)報(bào)警出故障;
④柱溫箱的廢液管盡量不要與其它各部件的廢液管共用,避免造成濕度過(guò)高而報(bào)警。另外,廢液管一定不要有向上拐彎的部份,否則廢液或冷凝水會(huì)倒流;
⑤盡量避免在低流速下設(shè)定較高溫度,易造成色譜柱的塌陷或老化;
⑥主機(jī)的兩測(cè)盡量不要長(zhǎng)時(shí)間放置揮發(fā)性的液體,以免造成柱溫箱傳感器報(bào)警;
⑦配有閥切換裝置的,在切換系統(tǒng)或切換閥之后要注意前一系統(tǒng)的影響??梢栽O(shè)定約3分鐘的平衡時(shí)間來(lái)完全消除(反相柱)。
(4)檢測(cè)器
①檢測(cè)器的紫外或可見(jiàn)燈在長(zhǎng)期打開(kāi)的情況下,一定要保證有溶液流經(jīng)檢測(cè)池。若不需要做樣,可設(shè)置一個(gè)較低的流速(如0. 1ml/min),不再使用儀器可關(guān)閉燈的電源;
②檢測(cè)器的燈一般是在流通池有溶液連續(xù)流動(dòng)幾分鐘后才開(kāi)的。如果流動(dòng)池中有氣泡,則會(huì)提示漂移過(guò)大無(wú)法通過(guò)自檢和校正;
③檢測(cè)器的氘燈或鎢燈不要經(jīng)常開(kāi)關(guān),每開(kāi)關(guān)一次燈的壽命會(huì)損失幾十小時(shí);
④連續(xù)兩次開(kāi)關(guān)燈之間應(yīng)至少間隔15分鐘。否則燈過(guò)熱易導(dǎo)致燒壞;
⑤流動(dòng)相中有緩沖鹽或酸堿時(shí),樣品分析完后一定要清洗流通池,以防止流通池污染或堵塞;
⑥流通池的石英玻璃片在未被污染的情況下盡量不要拆下來(lái)清洗。若被污染需要清洗,一定要謹(jǐn)慎操作并咨詢(xún)售后服務(wù)工程師;
⑦檢測(cè)器需盡量避免震動(dòng),需搬動(dòng)時(shí),一定要采取有效的防震措施;
⑧對(duì)于VWD紫外檢測(cè)器,盡量避免長(zhǎng)時(shí)間使用多波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè);
⑨對(duì)于CAD檢測(cè)器,在開(kāi)泵前或停泵時(shí)保證流路的氣源是打開(kāi)的。
(5)其它
①緩沖溶液與有機(jī)溶劑互相轉(zhuǎn)換前一定要用95%的去離子水清洗泵,防止鹽在有機(jī)相中結(jié)晶損壞泵中各組件和堵塞色譜柱;
②儀器使用前后一定要用甲醇或乙腈沖洗流路,平衡活化色譜柱,趕走管路中的雜質(zhì)和水分;
③ 緩沖溶液的濃度不能高于1. 0mol/L,pH范圍2~12(使用c18柱子時(shí),pH范圍2~7);
④儀器長(zhǎng)時(shí)間不用,每個(gè)泵通道和整個(gè)流路一定要用甲醇沖洗后保存,以免結(jié)晶或造成污染;
⑤各部分電源關(guān)機(jī)后再開(kāi)間隔時(shí)間不易過(guò)短,應(yīng)至少15秒鐘,檢測(cè)器至少15分鐘。
應(yīng)用場(chǎng)景
液相色譜儀是當(dāng)今的熱門(mén)的實(shí)驗(yàn)室儀器之一,被用在天然藥物化學(xué)、中藥化學(xué)等領(lǐng)域。
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